地西他滨对白血病细胞WT1基因表达及启动子区域甲基化水平的调控研究

【摘要】目的研究白血病细胞株U937、K562，白血病患者肿瘤细胞、正常人骨髓单个核细胞给予地西他滨(5-aza-2deoxycytidine，DAC)前后WT1基因的表达与启动子区域甲基化水平的改变以及两者之间的关系，观察U937细胞株、K562细胞株、正常人骨髓单个核细胞给予地西他滨前后凋亡的改变。探讨通过地西他滨的去甲基化作用来激活异基因造血干细胞移植后表达沉默或低下的WT1基因，从而刺激供体来源的WT1特异性CTL增加，增强移植物抗肿瘤效应的可能性。方法1.Real-timePCR法检测两种白血病细胞株U937、K562以及正常人骨髓单个核细胞的WT1基因mRNA表达量并比较区别；2.亚硫酸氢盐测序法（BSP）检测两种白血病细胞株及正常人骨髓单个核细胞WT1基因启动子区域的甲基化状况并比较区别；3.流式细胞仪测定经过不同浓度的地西他滨处理后两种白血病细胞株以及正常人骨髓单个核细胞的凋亡率；4.给予地西他滨去甲基化处理后再次检测两种白血病细胞株WT1基因mRNA表达和启动子区域甲基化状况并比较区别；5.采集临床使用地西他滨抗肿瘤疗法的患者使用地西他滨前后的外周血标本，测定其WT1基因mRNA表达和启动子区域甲基化状况的变化。结果：1.U937细胞株WT1mRNA的相对表达量多次测定均为阴性；K562细胞株WT1mRNA拷贝数为（5015±450）copies/10000copies；正常人骨髓单个核细胞的WT1mRNA拷贝数为（13±10）copies/10000copies；2.U937细胞WT1启动子区域甲基化率(89±5.9)%，K562细胞WT1启动子区域甲基化率(4±0.2)%，正常人骨髓单个核细胞WT1启动子区域甲基化率(2±0.1)%；3.地西他滨均可引起U937、K562细胞株的凋亡，具有时间和剂量依赖性；而作用于正常人骨髓单个核细胞后凋亡率较低，并且未体现时间依赖性；4.给予不同剂量地西他滨后U937、K562的WT1mRNA表达量均上升，具有时间剂量依赖性，且U937上升程度较大；给予不同剂量地西他滨后U937的WT1启动子区域甲基化水平下降明显，具有时间剂量依赖性；K562给药前后WT1基因启动子区域甲基化水平无明显变化。5.四例临床患者使用地西他滨后，WT1mRNA表达水平上升，且WT1基因启动子区域甲基化水平有不同幅度下降。结论：1.在白血病细胞株U937、K562中，WT1基因mRNA表达和启动子区域甲基化水平呈负相关，而正常人骨髓单个核细胞上WT1基因表达阴性，且启动子区域低甲基化。2.地西他滨对于白血病细胞株U937、K562促进凋亡，并且促凋亡的效应强于对正常人骨髓单个核细胞促凋亡效应。3.地西他滨对于白血病细胞株U937WT1启动子区域去甲基化作用显著，并有效提高WT1基因mRNA表达量。在临床患者体内也有相似效应。
【作者】王婧；
【导师】傅琤琤；
【作者基本信息】苏州大学，内科学，2014，硕士
【关键词】地西他滨；DNA甲基化；WT1；白血病；

【参考文献】
[1]沈训欢.无刷旋转变压器的研究[D].广东工业大学,电机与电器,2013,硕士.
[2]赵国琴,李小雁,吴华武,张思毅,李广泳.青海湖流域具鳞水柏枝植物水分利用氢同位素示踪研究[J].植物生态学报,2013,12:1091-1100.
[3]丁楹.宋遗民词的隐逸文化阐释[D].广西师范大学,中国古典文学,2003,硕士.
[4]李金.遗嘱处分财产范围限制立法的探讨[D].广西师范大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[5]李诗卉.新世纪以来中国武侠片的转型[D].西南交通大学,艺术学,2013,硕士.
[6]赵成刚,韦昌富,蔡国庆.土力学理论的发展和面临的挑战[J].岩土力学,2011,12:3521-3540.
[7]肖雯雯.六年制小学教师培养中“音乐基础”课程教学研究[D].湖南师范大学,音乐学,2013,硕士.
[8]熊鑫.吐鲁番出土《文选》残卷研究[D].西南民族大学,中国古典文献学,2013,硕士.
[9]刘琼.英租威海卫乡村治理：传统的接续与现代性的生发[D].山东大学,政治学理论,2014,博士.
[10]谢洪磊.抗肿瘤药物诺考达唑的合成研究[D].辽宁医学院,药物化学,2012,硕士.
[11]秦书玲.多用途公司活动现场管理系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[12]田凌怡.住房抵押贷款证券化运作机理及其在我国的应用研究[D].广西大学,工商管理,2004,硕士.
[13]李金洛.创业板IPO超募引发的法律风险研究[D].吉林大学,民商法学,2013,硕士.
[14]宋小姣.白居易诗歌联合式复音词研究[D].西北大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[15]马竹梧.冶金检测仪表和成分分析技术进展及开发的几个问题[J].冶金自动化,2012,03:1-7.
[16]何亮.论赃物的善意取得[D].复旦大学,法律,2012,硕士.
[17]贺之渊,汤广福,邓占锋,郑健超.TSC高压晶闸管阀过电流失效机理[J].电力系统自动化,2007,13:23-28.
[18]孙嘉晖.违法所得没收程序研究[D].华侨大学,法律,2014,硕士.
[19]刘金凤.中美高中力学教材中科学方法教育的比较研究[D].曲阜师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[20]李芳,游小杰,李艳.多族微电感功率变换器的相平面分析及特性研究[J].电工技术学报,2014,S1:242-249.
[21]沙京祺.认知OFDM协作系统资源分配算法研究[D].吉林大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[22]梁庆标.乔伊斯的犹太意识与世界视野[D].苏州大学,比较文学与世界文学,2003,硕士.
[23]杜中华.湖南省农业生态环境恢复与重建对策研究[D].湖南农业大学,种植,2003,硕士.
[24]张燕玲.碳纳米材料及其磁功能化组装的研究[D].东华大学,2011.
[25]蔡猛.动车运用所信息系统云计算支撑平台的设计与实现[D].北京交通大学,2014.
[26]马先帅.关于不同语言能力下的非英语专业大一新生跨文化交际能力调查研究[D].南京理工大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[27]祝天姿.综掘面机载风幕集尘除尘装置研究[D].辽宁工程技术大学,机械设计及理论,2012,硕士.
[28]何东伟.含咔唑、萘酐基团聚合物的合成及其电存储性能的研究[D].苏州大学,有机化学,2014,硕士.
[29]周民.农户使用惠农卡的影响因素及其满意度的实证研究[D].南京农业大学,农业推广,2011,硕士.
[30]丁同民,丁松.关于我国现行涉农土地管理法规修订理念的思考[J].经济体制改革,2014,02:79-83.
[31]尹山兰.多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞PPARγ、P450arom表达及与IVF-ET结局关系研究[D].郑州大学,生殖医学,2013,硕士.
[32]杨超.全地面起重机塔臂工况回转对主臂力学性能影响研究[D].大连理工大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[33]刘雯丽.AOD炉气路过程控制[J].冶金自动化,1993,05:50-51.
[34]王慧.不同损失限制下的最优保费研究[D].吉林大学,基础数学,2013,硕士.
[35]唐宁.灾后重建地区城镇化问题研究[D].西南交通大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[36]王建新,姚益江,陈晓莉.PLC在原料场大型取料机上的应用[J].冶金自动化,2003,01:69-70.
[37]刘君.发电厂220kV升压站接地技术研究[D].天津大学,电气工程,2013,硕士.
[38]宋玉杰.高考作文文体意识淡化成因调查及对策分析[D].西北师范大学,农村教育,2013,硕士.
[39]刘嘉琪.圣严法师的人间佛教思想研究[D].湖南师范大学,宗教学,2014,硕士.
[40]陈浩.美声教学中的发声机制与语音的分析初探[D].西安音乐学院,声乐教学与演唱,2014,硕士.
[41]杨威.基于机器视觉的注塑过程检测技术[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[42]慕林峰.4KW太阳能焊接工程车的系统设计[D].西南交通大学,机械工程,2014,硕士.
[43]杨雅恬.企业协同知识创新团队激励机制研究[D].华侨大学,技术经济与管理,2014,硕士.
[44]李丹.浅析互联网金融及其对商业银行的影响[D].苏州大学,金融（专业学位）,2014,硕士.
[45]王延平.C2C交易税收法律制度研究[D].重庆大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[46]王婷.贵州农村中小学教师参与“国培计划”兴趣的研究[D].贵州师范大学,基础心理学,2014,硕士.
[47]王勇.邯郸幼儿特长教育现状调查与对策研究[D].河北师范大学,教育管理,2014,硕士.
[48]陆茸.Oxymoron in Shakespeare’s Plays[D].安徽大学,英语语言文学,2004,硕士.
[49]冉昆鹏.中国证券市场宏观调控法律问题研究[D].山西大学,经济法学,2004,硕士.
[50]梁强.内镜下扩大经鼻入路海绵窦区解剖研究[D].兰州大学,外科学,2013,硕士.